微生物分液是微生物实验、生物制药及临床检测中的基础关键操作，其操作规范性直接影响实验结果的准确性、样品纯度及后续实验的可靠性。在实际操作中，气泡产生、液体挂壁、交叉污染三大问题频发，不仅降低分液效率，还可能导致实验数据失真、样品报废等风险。本文结合实操经验，对三大问题的成因及解决策略进行详细阐述，为相关从业者提供参考。
气泡问题是微生物分液中最常见的困扰，其核心成因主要包括液体转移时流速过快、样品中溶解气体释放、分液器具未预处理等。气泡会导致分液体积偏差，还可能破坏微生物细胞完整性，影响后续培养或检测结果。解决该问题需从操作规范和器具预处理两方面入手：预处理阶段，将待分液样品提前静置15-30分钟，让溶解气体充分释放，同时对移液管、分液漏斗等器具进行润洗，避免器具内壁残留空气；操作时控制液体流速，采用“缓慢提拉、匀速释放”的方式，若使用移液器，可先将移液器枪头浸入液体后缓慢吸液，吸液后停留1-2秒，排出枪头内残留气泡，对于易产生气泡的样品（如含表面活性剂的培养基），可适当降低吸液高度。
液体挂壁主要源于样品黏性、器具内壁光滑度不足及操作方式不当，黏性较大的微生物样品（如菌液、含血清培养基）更易出现挂壁现象，导致实际分液量不足，影响实验重复性。解决挂壁问题需兼顾器具选择与操作优化：优先选用内壁经过硅化处理或高光滑度的分液器具，减少液体吸附；分液前用待分液样品润洗器具2-3次，使器具内壁形成一层样品薄膜，降低后续挂壁概率；操作时可轻微倾斜器具，让液体沿器壁缓慢流动，分液结束后停留片刻，确保残留液体充分流出，对于顽固性挂壁，可在不影响样品活性的前提下，适当提高样品温度（控制在4-37℃），降低液体黏度。
交叉污染是微生物分液中最严重的问题，其成因主要为器具清洗不好、操作过程中样品接触污染、环境无菌性不足等，一旦发生污染，会导致实验结果全失效，甚至造成批量样品报废。防控交叉污染需建立全流程无菌操作体系：器具清洗后必须经过高压灭菌或干热灭菌处理，灭菌后妥善存放，避免二次污染，对于一次性器具（如枪头、离心管），需选用无菌包装产品，开封后立即使用；操作时严格遵循无菌操作规范，佩戴无菌手套、口罩，使用无菌操作台，不同样品的分液器具分开使用，严禁交叉复用；分液过程中避免样品溅出，若发生溅出，立即用无菌消毒剂处理操作台及周边环境，同时更换受污染的器具和样品。
微生物分液的核心要求是“精准、无菌、无干扰”，气泡、挂壁、交叉污染三大问题的解决，需结合成因针对性优化操作流程、规范器具管理、严控无菌环境。实际操作中，操作人员还需根据样品特性（如黏度、微生物活性）灵活调整策略，定期开展操作培训与质量核查，确保分液操作的准确性与可靠性，为后续实验及生产工作奠定坚实基础。
